Molecular and functional characterization of pathways relevant to metastasis and cancer therapy in circulating tumor cells of breast and prostate cancer patients
Klassische Gewebsbiopsien und bildgebende Verfahren (z.B. Radiologie) haben die Behandlung von Krebspatienten, sowie unser Verständnis der Karzinogenese, Metastasierung, des Ansprechens auf sowie der Resistenz gegenüber Therapeutika maßgeblich bestimmt. Innerhalb der letzten Jahre hat die Untersuchung zirkulierender Tumorzellen (CTCs) als Form der nicht-invasiven Flüssigbiopsie zunehmend wissenschaftliches und klinisches Interesse geweckt. Die Enumeration zirkulierender Tumorzellen ist ein wertvoller prognostischer Marker für das Überleben von Krebspatienten, sowie ein Surrogatmarker für das Therapieansprechen in mehreren Krebsentitäten. Die molekulare Charakterisierung von CTCs hat unser Verständnis der intra-Tumor Heterogenität und deren Einfluss auf Therapieansprechen und Prognose zudem entscheidend erweitert. Die Forschung an CTCs eröffnet einen Weg in Richtung personalisierter Medizin für Krebspatienten. Eines der größten Hindernisse der CTC-Analyse ist die Seltenheit mit der diese Zellen in der Blutbahn vorliegen. Die Anzahl detektierbarer CTCs zu maximieren stellt daher weiterhin ein höchst relevantes Ziel dieses Forschungsfeldes dar. Innerhalb dieser Arbeit wurden weitreichende Anstrengungen unternommen um ein vielversprechendes, größenbasiertes CTC Anreicherungs-verfahren zu optimieren und analytisch zu validieren. Die Anzahl detektierter CTCs konnte erfolgreich um das 4,7-fache erhöht werden. Dies wurde im direkten Vergleich gepaarter Patientenproben metastatischer Brustkrebspatientinnen nachgewiesen. Es wurden zudem zwei robuste Protokolle entwickelt, welche die Detektion unfixierter (EDTA) sowie fixierter (TransFix®) Einzelzellen und sogenannter CTC-Cluster (CTC-Gruppen/Aggregate) ermöglichen. Die Leistungsfähigkeit dieser Protokolle wurde anhand einer gemischten Krebspatientenkohorte bestätigt. Des Weiteren wurde die Vereinbarkeit der entwickelten Protokolle mit gängigen molekularen Analyseverfahren, sowie mit einem semi-automatisierten Nachweisverfahren demonstriert. In einem weiteren Schritt wurde ...